غربالگری آبی سفید برای تایید کلونینگ

روش غربالگری آبی-سفید چیست ؟

انتخاب آبی- سفید، روشی است که در آن با استفاده از بیان ژن lacZ در باکتری ای کلای، کلونی های باکتریایی دارای پلاسمید حامل DNA خارجی، تشخیص داده می شود. هنگامی که DNA خارجی درون وکتور حضور داشته باشد، بعد از عمل ترانسفورماسیون، دو حالت برای کلونی های باکتری ایجاد می شود؛ کلونی هایی که تنها دارای وکتور هستند و کلونی هایی که دارای وکتور نوترکیب هستند. بررسی تک تک کلنی های باکتریایی به منظور تشخیص حضور DNA مورد نظر در آن ها، کاری بسیار زمان بر است.

روش غربالگری آبی- سفید

بنابراین روش غربالگری آبی- سفید می تواند مفید باشد چرا که زمان و نیروی انسانی کمتری نیاز دارد. این روش بر پایه تفکیک کلونی های رنگ گرفته در صفحات انتخابی است به منظور غربالگری سلول های ترانسفورم شده ای که دارای وکتور نوترکیب هستند. اگرچه استفاده از آنتی بیوتیک ها به عنوان نشانگر برای تایید ترانسفورماسیون انجام می گرفت اما در این روش هم سلول هایی که دارای وکتور معمولی بودند و هم سلول هایی که وکتور نوترکیب را دریافت کرده بودند، می توانستند رشد کنند، بنابراین روش اضافی دیگری برای تفکیک بین وکتورهای نوترکیب و وکتورهای غیر نوترکیب نیاز بود.

بعد از گذشت سال ها که از استرس های آنتی بیوتیک برای تایید باکتری های ترانسفورم شده استفاده می شد، امروزه برای این منظور، از روش انتخاب آبی-سفید استفاده می شود. در روش انتخاب آبی –سفید، DNA به درون جایگاه محدود کننده ژن lacZ کلون می شود. ژن lacZ، آنزیم بتاگالاکتوزیداز را که مسئول تجزیه دی ساکارید لاکتوز به مونوساکاریدهای گالاکتوز و گلوکز است، را کد می کند. بنابراین هنگامی که قطعه ژن خارجی به درون جایگاه محدود کننده lacZ وارد شود، در عملکرد این ژن اختلال ایجاد شده و بنابراین نمی تواند فعالیت خود را انجام دهد.

X-gal آنالوگ لاکتوز است که به صورت ویژه طراحی شده است که هنگام برهمکنش با آنزیم بتا گالاکتوزیداز، تغییر رنگ را موجب شود.