بررسی بیان ژن با ریل تایم پی سی آر
تومان۴۵.۰۰۰
کاربرد: بررسی بیان ژن به روش Real-time PCR پیشرفته‌ترین روش‌ها برای بررسی بیان ژن است. این روش‌ها مزایای بسیار بیشتری نسبت به روش‌های قدیمی چون آشکارسازی افتراقی، آرایه تولید RNase و Northern blot دارد. این روش قابلیت استفاده برای شمارش DNA به دو صورت نسبی و مطلق را دارد. تا کنون این روش حساس‌ترین روش برای بررسی کمی سطح بیان mRNA می‌باشد.
در آزمایشگاه‌ها ریل تایم پی سی آر کاربردهای فراوانی جهت تشخیص و تحقیق مانند بیماری‌های عفونی، سرطان و ژن‌های غیر طبیعی دارد. در آزمایشات میکروب شناسی از ریل تایم پی سی آر بطور کلی در زمینه امنیت غذایی، فساد غذایی و تخمیر استفاده می‌شود. در مطالعات زیست پالایی، ریل تایم پی سی آر روشی مفید برای بررسی سطح بیان ژن‌های مربوط به زیست پالایی آلاینده‌های سمی است.
نوع فایل: pdf
حجم فایل: 2.46 MB
تعداد صفحات: 40
- ویرایش دوم : 1 اسفند 1402
تغییرات اعمال شده: بهره گیری از تجربیات شخصی – بازبینی و تصحیح متن – افزایش روانی مطالب – تکمیل مباحث و اضافه شدن 17 صفحه – پوشش دادن تقریبا تمامی مطالب و نکاتی که یک فرد برای انجام دادن این تکنیک نیاز به دانستن آن دارید – کمک گرفتن از دو هندبوک دیگر برای تکمیل محتوا
توضیحات
بررسی بیان ژن با ریل تایم پی سی آر
روش مورد استفاده برای تکثیر و شمارش همزمان DNA هدف واکنش کمی پلیمراز(Quantitative polymerase reaction) یا Real-time PCR می نامند. این روش بر اساس اصول PCR می‌باشد و شمارش می‌تواند تعداد مطلق یا مقدار نسبی پس از استاندارد سازی رشته DNA الگو باشد. از زمان کشف این روش پیشرفت‌های بسیاری چون استفاده از رنگ‌های فلوئورسنت با قابلیت چسبیدن بین رشته‌های DNA یا استفاده از کاوشگرهای برچسب دار شده توالی‌های اختصاصی DNA با نشانگر فلوئورسنت انجام شده است.
به روش Real-time PCR به دلیل حساسیت بالای این روش در شمارش ژن مورد نظر در مقایسه با روش‌های معمولی چون Northern blot و Southern blot، PCR کینیتیکی هم می‌گویند. این روش حتی برای بررسی سطح RNA از یک تک سلول بسیار حساس است. سلول‌ها DNA را به RNA رونویسی می‌کنند و از طریق این رونویسی سطح بیان ژن را تنظیم می‌کنند. در نتیجه میزان بیان ژن در سلول را می‌توان از طریق تعداد کپی‌های mRNA مربوط به ژن خاص موجود در درون سلول اندازه‌گیری کرد. برای ساخت cDNA از RNA از آنزیم رونوشت بردار معکوس استفاده می‌شود، جزئیات این روش در فصل قبل توضیح داده شده است (آزمایش 3-1). DNA هدف می‌تواند پس از ساخت cDNA تکثیر شود و بررسی کمی نمونه DNA می‌تواند پس از هرچرخه انجام شود.
qRT-PCR و ریزآرایه DNA پیشرفته‌ترین روش‌ها برای بررسی بیان ژن است. این روش‌ها مزایای بسیار بیشتری نسبت به روش‌های قدیمی چون آشکارسازی افتراقی، آرایه تولید RNase و Northern blot دارد. این روش قابلیت استفاده برای شمارش DNA به دو صورت نسبی و مطلق را دارد. همچنین این روش می‌تواند برای مقدار سنجی سطح بیان mRNA از ژن‌های خودی و ژن‌های منتقل شده پایدار یا گذرا به کار برده شود.
تا کنون این روش حساس‌ترین روش برای بررسی کمی سطح بیان mRNA می‌باشد. در آزمایشگاه‌ها qRT-PCR کاربردهای فراوانی جهت تشخیص و تحقیق مانند بیماری‌های عفونی، سرطان و ژن‌های غیر طبیعی دارد. در آزمایشات میکروب شناسی از qRT-PCR بطور کلی در زمینه امنیت غذایی، فساد غذایی و تخمیر (مانند ارزیابی خطر میکروبی کیفیت آب آشامیدنی) استفاده می‌شود. در مطالعات زیست پالایی، qRT-PCR روشی مفید برای بررسی سطح بیان ژن‌های مربوط به زیست پالایی آلاینده‌های سمی است…
روش مورد استفاده برای تکثیر و شمارش همزمان DNA هدف واکنش کمی پلیمراز(Quantitative polymerase reaction) یا Real-time PCR می نامند. این روش بر اساس اصول PCR می‌باشد و شمارش می‌تواند تعداد مطلق یا مقدار نسبی پس از استاندارد سازی رشته DNA الگو باشد. از زمان کشف این روش پیشرفت‌های بسیاری چون استفاده از رنگ‌های فلوئورسنت با قابلیت چسبیدن بین رشته‌های DNA یا استفاده از کاوشگرهای برچسب دار شده توالی‌های اختصاصی DNA با نشانگر فلوئورسنت انجام شده است.
به روش Real-time PCR به دلیل حساسیت بالای این روش در شمارش ژن مورد نظر در مقایسه با روش‌های معمولی چون Northern blot و Southern blot، PCR کینیتیکی هم می‌گویند. این روش حتی برای بررسی سطح RNA از یک تک سلول بسیار حساس است. سلول‌ها DNA را به RNA رونویسی می‌کنند و از طریق این رونویسی سطح بیان ژن را تنظیم می‌کنند. در نتیجه میزان بیان ژن در سلول را می‌توان از طریق تعداد کپی‌های mRNA مربوط به ژن خاص موجود در درون سلول اندازه‌گیری کرد. برای ساخت cDNA از RNA از آنزیم رونوشت بردار معکوس استفاده می‌شود، جزئیات این روش در فصل قبل توضیح داده شده است (آزمایش 3-1). DNA هدف می‌تواند پس از ساخت cDNA تکثیر شود و بررسی کمی نمونه DNA می‌تواند پس از هرچرخه انجام شود.
qRT-PCR و ریزآرایه DNA پیشرفته‌ترین روش‌ها برای بررسی بیان ژن است. این روش‌ها مزایای بسیار بیشتری نسبت به روش‌های قدیمی چون آشکارسازی افتراقی، آرایه تولید RNase و Northern blot دارد. این روش قابلیت استفاده برای شمارش DNA به دو صورت نسبی و مطلق را دارد. همچنین این روش می‌تواند برای مقدار سنجی سطح بیان mRNA از ژن‌های خودی و ژن‌های منتقل شده پایدار یا گذرا به کار برده شود.
تا کنون این روش حساس‌ترین روش برای بررسی کمی سطح بیان mRNA می‌باشد. در آزمایشگاه‌ها qRT-PCR کاربردهای فراوانی جهت تشخیص و تحقیق مانند بیماری‌های عفونی، سرطان و ژن‌های غیر طبیعی دارد. در آزمایشات میکروب شناسی از qRT-PCR بطور کلی در زمینه امنیت غذایی، فساد غذایی و تخمیر (مانند ارزیابی خطر میکروبی کیفیت آب آشامیدنی) استفاده می‌شود. در مطالعات زیست پالایی، qRT-PCR روشی مفید برای بررسی سطح بیان ژن‌های مربوط به زیست پالایی آلاینده‌های سمی است…
فهرست مطالب:
مقدمه
قاعده کلی
موادهای مورد نیاز و نقش آن ها
– سایبرگرین
– آغازگر جلو و پشت
– آب بدون نوکلئاز
– الگو DNA/cDNA
روش کار
مشاهدات
جدول نتایج
حل مشکلات
مراحل انجام کار به صورت روندنما
احتیاط ها
اکرم –
سلام و وقت بخیر، آیا فایل های آموزشی همراه با تحلیل نتایج هستند؟ برای مثال نتایج ریل تایم هم تحلیل میشوند و چگونگی کاربرد دیتای حاصل از ریل تایم در مقالات در این فایل توضیح داده شده؟
با تشکر
سعید کارگر –
سلام وقت شما بخیر باشد، این فایل آموزشی فعلا همراه با ویدیو آموزشی تیست. فعلا در این فایل نتیجه ای تحلیل نمی شود، ولی آموزش داده شده که از چه طریقی باید نتایج رو تحلیل کرد