سنتز cDNA

تومان۳۰.۰۰۰

از cDNA برای کلون کردن ژن در سلول‌ها، ساختن کتابخانه cDNA و یا به‌عنوان پروب در آنالیز ژن‌ها استفاده می‌شود. شاید امروزه مهم‌ترین کاربرد این cDNA بررسی سطح بیان ژن‌ها در تکنیک کمی real-time PCR باشد که در آن cDNA به‌عنوان الگو مورد استفاده قرار می‌گیرد.
با پیشرفت تکنیک‌های مهندسی ژنتیک بررسی الگوی بیان ژن‌ها در سلول اهمیت ویژه‌ای پیداکرده است. بدین منظور mRNAهای موجود جداسازی و مقدار mRNA اندازه‌گیری می‌شود و می‌توان برای تولید پروتئین موردنظر به DNA رمزگذاری شود. مولکول RNA به دلیل ماهیت شکننده و بسیار ناپایدار خود، RNA آماده تجزیه شدن توسط ریبونوکلئازهایی است که در همه‌جا حضور دارند. برای حل این مشکل از RNA توالی cDNA تهیه می‌شود.

نوع فایل : pdf

حجم فایل : 1.5MB

تعداد صفحات : 27

توضیحات

مقدمه: DNA مکمل یا cDNA مولکول DNA است که از mRNA ایجادشده است. دو آنزیم ترانس‌کریپتاز معکوس و DNA پلی‌مراز وظیفه ساختن cDNA را به عهده‌دارند. طبق سنترال دوگما، DNA به RNA رونویسی می‌شود که سپس برای انجام دادن فعالیت‌های سلولی به پروتئین ترجمه می‌شود. تفاوت اصلی بین mRNA پروکاریوتی و یوکاریوتی حضور یا عدم حضور توالی اینترون بین اگزون‌ها است. در طول رونویسی از mRNA یوکاریوتی، توالی اینترون‌ها بریده و جدا می‌شوند که mRNA بدون اینترون به آمینواسیدها برای انجام کار موردنظر ترجمه می‌شوند. در ژن‌های پروکاریوت‌ها اینترون وجود ندارد.
از cDNA برای کلون کردن ژن در سلول‌ها، ساختن کتابخانه cDNA و یا به‌عنوان پروب در آنالیز ژن‌ها استفاده می‌شود. شاید امروزه مهم‌ترین کاربرد این cDNA بررسی سطح بیان ژن‌ها در تکنیک کمی real-time PCR (qRT-PCR) باشد که در آن cDNA به‌عنوان الگو مورداستفاده قرار می‌گیرد. cDNA را می‌توان به‌عنوان نسخه DNA دو رشته‌ای یک مولکول mRNA تعریف کرد. در بسیاری از مواقع واکنش سنتز تولید این مولکول توسط نوع ویژه‌ای از ترانس‌کریپتاز معکوس انجام می‌شود که از رتروویروس جداسازی شده است. این آنزیم ابتدا از روی mRNA تک رشته DNA را می‌سازد که در مرحله بعدی می‌تواند خود به‌عنوان الگوی برای سنتز dsDNA استفاده شود.

فهرست مطالب:

1- موضوع
2- مقدمه
3- قاعده کلی
4- مواد موردنیاز و نقش آن‌ها
     ترانسکریپتاز معکوس
     مهارکننده ریبونوکلئازی
     هگزامرهای رندوم / الیگو dT
     بافر واکنش
5- مراحل انجام کار
    حذف کامل DNA ژنومی از RNA
    سنتز نخستین رشته cDNA
    تکثیر نخستین رشته cDNA با استفاده از PCR
6-  مشاهدات
7- حل مشکلات
8- احتیاط‌ها
9- مراحل انجام کار
10- نویسندگان
11- رفرنس

نقد و بررسی‌ها

هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.

اولین کسی باشید که دیدگاهی می نویسد “سنتز cDNA”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *