توضیحات

پی سی آر چندگانه برای تشخیص سریع باکتری‌ها

PCR چندگانه (Multiplex PCR) تغییر شکل یافته روش PCR معمول برای رصد سریع حذف، دوبرابر شدن، حضور یا نبود قطعه‌ای از ژن است. این روش می‌تواند از طریق تکثیر نمونه DNA ژنومی با کمک آغازگرهای چند گانه و Taq پلیمراز انجام شود. هنگامی که بیش از یک ژن در هر مرتبه مورد نظر باشد، اطلاعات بیشتری از یک ارگانیسم می‌تواند با یک تک PCR به‌دست آید که نیاز به چندین آزمایش و واکنش دهنده‌های بیشتر برای به‌دست آوردن آن نتیجه دارد. از این رو، دمای اتصال برای تمامی آغازگرهای استفاده شده باید بهینه شده تا آن‌ها بتوانند در یک واکنش PCR دسته ژنی درستی را تکثیر کنند.

کاربردهای معمول پی سی آر چندگانه شامل شناسایی بیماری‌زاها، تنوع ژنوتیپی SNP، بررسی جهش، بررسی حذف ژن، مقدار الگو، بررسی ارتباط، رصد RNA، مطالعات دعاوی قانونی و بررسی رژیم غذایی است. با استفاده از روش PCR چندگانه، مقدار قابل توجهی زمان و تلاش می‌تواند به دلیل تکثیر همزمان چندین توالی ژن در یک اجرای PCR ذخیره شود. امروزه، آزمون PCR چندگانه به وسیله‌ای سریع و معمول برای آزمایش در بیمارستان‌ها و آزمایشگاها تبدیل شده است. برای توسعه موثر آزمایش پی سی آر چندگانه، برنامه ریزی راهبردی و تلاش‌های زیادی برای بهینه‌سازی شرایط واکنش نیاز است.

ترکیب مطلوب دمای اتصال و غلظت بافری هنگام PCR چندگانه برای به‌دست آوردن محصول تکثیری خاص مورد نیاز است. از این رو، پیش از استفاده در مرحله بالینی حساسیت و اختصاصیت روش باید کاملا از طریق استفاده از نوکلئویک اسید خالص استاندارد با کنترل درونی و بیرونی مناسب ارزیابی شود. چون تعداد عوامل میکروبی که بتوان با PCR رصد کرد بسیار زیاد است، PCR به روشی بسیار مطلوب برای اهداف عملی تبدیل شده که رصد همزمان دو یا چند عامل که باعث سندروم‌های بالینی مشابه شده و ویژگی‌های اپیدیمیولوژی مشابهی را منتشر می‌کنند، را ممکن می سازد.

با این وجود، محدودیت‌های فراوانی هنگام بررسی پی سی آر چندگانه برای دسته‌ای از ژن‌ها وجود دارد. در این مورد، دسته‌های آغازگر باید طوری انتخاب شوند که دمای اتصال یکسان بوده، طول محصول تکثیر شده یکسان بوده تا احتمال آغازگری اشتباه و خود آغازگری کاهش یابد. امروزه کیت‌های تجاری فراوانی برای بررسی سریع نمونه DNA تجزیه شده برای کابردهای قانونی استفاده می‌شود.