چکیده و جمع بندی فلوسایتومتری
فلوسایتومتری یک تکنیک آزمایشگاهی است که برای اندازه گیری و آنالیز ویژگی های فیزیکی و شیمیایی سلول ها یا ذرات استفاده می شود. این تکنیک بر اساس پراکندگی نور توسط سلول ها یا ذرات و انتشار فلورسانس از آنها استوار است.
اصول فلوسایتومتری
در فلوسایتومتری، سلول ها یا ذرات در یک جریان مایع از طریق یک لوله شیشه ای یا پلاستیکی عبور می کنند. در طول مسیر، سلول ها یا ذرات توسط یک پرتو نور روشن می شوند. پرتو نور می تواند توسط سلول ها یا ذرات پراکنده شود یا از آنها عبور کند. پراکندگی نور می تواند به دو نوع تقسیم شود:
- پراکندگی استوایی : پراکندگی استوایی پراکندگی نور است که در زاویه 90 درجه نسبت به منبع نور رخ می دهد. این پراکندگی به اندازه سلول یا ذره بستگی دارد.
- پراکندگی جانبی : پراکندگی جانبی پراکندگی نور است که در زاویه کمتر از 90 درجه نسبت به منبع نور رخ می دهد. این پراکندگی به اندازه و شکل سلول یا ذره بستگی دارد.
اگر سلول ها یا ذرات دارای ویژگی های شیمیایی خاصی باشند، می توانند نور را جذب کنند و سپس آن را به صورت فلورسانس منتشر کنند. انتشار فلورسانس به شدت و طول موج نور جذب شده بستگی دارد.
دستگاه فلوسایتومتر
دستگاه فلوسایتومتر از اجزای زیر تشکیل شده است:
- منبع نور : منبع نور در فلوسایتومتر می تواند یک لامپ فلورسنت، یک لیزر یا یک منبع نور دیگر باشد.
- سیستم پراکندگی : سیستم پراکندگی در فلوسایتومتر پراکندگی نور را از سلول ها یا ذرات اندازه گیری می کند.
- سیستم فلورسانس : سیستم فلورسانس در فلوسایتومتر انتشار فلورسانس از سلول ها یا ذرات را اندازه گیری می کند.
- سیستم پردازش داده ها : سیستم پردازش داده ها در فلوسایتومتر داده های اندازه گیری شده را پردازش و تجزیه و تحلیل می کند.
کاربردهای فلوسایتومتری
فلوسایتومتری در طیف گسترده ای از کاربردها استفاده می شود، از جمله:
- تجزیه و تحلیل جمعیت سلولی : فلوسایتومتری می تواند برای تجزیه و تحلیل جمعیت سلولی بر اساس ویژگی های فیزیکی و شیمیایی سلول ها استفاده شود. این کاربردها شامل شمارش سلول ها، اندازه گیری اندازه سلول ها، تعیین شکل سلول ها، تعیین محتوای پروتئین سلول ها و تعیین وضعیت فعال سازی سلول ها است.
- تشخیص بیماری : فلوسایتومتری می تواند برای تشخیص بیماری های خونی، سرطان و سایر بیماری ها استفاده شود. این کاربردها شامل تشخیص سلول های سرطانی، تعیین میزان بیان ژن ها و تعیین سطح آنتی بادی ها است.
- تحقیقات دارویی : فلوسایتومتری می تواند برای مطالعه اثرات داروها بر سلول ها استفاده شود. این کاربردها شامل مطالعه مکانیسم عمل داروها، تعیین سمیت داروها و تعیین اثربخشی داروها است.
مزایا و معایب فلوسایتومتری
مزایا
- سرعت : فلوسایتومتری می تواند به سرعت جمعیت زیادی از سلول ها را آنالیز کند.
- حساسیت : فلوسایتومتری می تواند سلول ها یا ذرات بسیار کمی را تشخیص دهد.
- تکراری : نتایج فلوسایتومتری معمولاً تکرارپذیر هستند.
معایب
- هزینه : دستگاه های فلوسایتومتر می توانند گران باشند.
- تخصص : انجام فلوسایتومتری به مهارت و تجربه نیاز دارد.
جمع بندی
فلوسایتومتری یک تکنیک قدرتمند است که برای طیف گسترده ای از کاربردها استفاده می شود. این تکنیک دارای مزایای زیادی از جمله سرعت، حساسیت و تکرارپذیری است.
معنی لغوی flowcytometry چیست؟
دستگاه فلوسایتومتری در هر ثانیه چه تعداد سلول را خوانش می کند؟
چه سایز سلول های در دستگاه فلوسایتومتری قابل خوانش هست؟
تعریف یکسری اصطلاحات در فلوسایتومتری
Flow cell
Flow cell قسمتی از دستگاه فلوسایتومتری است که سلول ها در آن همراه با یک جریان مایع عبور می کنند و ویژگی های فیزیکی و شیمیایی آن ها اندازه گیری می شود. Flow cell معمولاً از یک صفحه متخلخل ساخته شده است که سلول ها از آن عبور می کنند.
Integration point
Integration point نقطه ای در Flow cell است که در آن سلول ها با نور لیزر برخورد می کنند و ویژگی های آن ها اندازه گیری می شود. Integration point معمولاً با استفاده از یک لیزر و یک سیستم نوری انجام می شود. Integration point معمولاً در قسمت خروجی Flow cell قرار دارد. لیزر در Integration point پراکندگی نوری و فلورسانس سلول ها را اندازه گیری می کند.
Sheath solution
Sheath solution معمولاً از یک محلول نمکی ساخته می شود که دارای غلظت مشابه با غلظت نمونه سلول ها است. این امر باعث می شود که جریان سلول ها و جریان sheath solution به صورت یکنواخت در هم مخلوط شوند. Sheath solution از طریق یک کانال جداگانه وارد دستگاه فلوسایتومتری می شود. این کانال معمولاً در کنار کانالی که نمونه سلول ها از آن عبور می کند، قرار دارد.
Hydrodynamic focusing
Hydrodynamic focusing معمولاً با استفاده از یک جریان sheath solution با سرعت بالاتر از جریان سلول ها انجام می شود. این امر باعث می شود که جریان سلول ها به سمت مرکز جریان sheath solution جذب شوند. Hydrodynamic focusing در قسمت ورودی Flow cell انجام می شود. در این قسمت، جریان sheath solution با زاویه 90 درجه به جریان سلول ها برخورد می کند. Hydrodynamic focusing یک فرآیند مهم در دستگاه فلوسایتومتری است که دقت اندازه گیری را افزایش می دهد. پارامترهای مختلفی وجود دارند که می توانند بر عملکرد hydrodynamic focusing تأثیر بگذارند. از جمله این پارامترها می توان به:
- سرعت جریان sheath solution: سرعت جریان sheath solution باید بالاتر از جریان سلول ها باشد تا hydrodynamic focusing به درستی انجام شود.
- غلظت sheath solution: غلظت sheath solution باید مشابه با غلظت نمونه سلول ها باشد تا hydrodynamic focusing به درستی انجام شود.
- زاویه برخورد جریان sheath solution با جریان سلول ها: زاویه برخورد جریان sheath solution با جریان سلول ها باید 90 درجه باشد تا hydrodynamic focusing به درستی انجام شود.
به طور کلی، sheath solution و hydrodynamic focusing دو قسمت مهم از دستگاه فلوسایتومتری هستند که عملکرد صحیح دستگاه را تضمین می کنند.
انواع نمودار در فلوسایتومتری
انواع مختلفی از نمودار در فلوسایتومتری وجود دارد که برای نمایش داده های فلوسایتومتری استفاده می شود. برخی از متداول ترین انواع نمودار عبارتند از:
- هیستوگرام: یک هیستوگرام یک نمودار خطی است که میزان وقوع یک متغیر را در یک جمعیت نشان می دهد. در فلوسایتومتری، هیستوگرام ها اغلب برای نشان دادن توزیع شدت سیگنال فلورسانس در یک جمعیت سلولی استفاده می شوند.
- نمودار نقطه ای: یک نمودار نقطه ای یک نمودار دو بعدی است که دو متغیر را در یک جمعیت نشان می دهد. در فلوسایتومتری، نمودارهای نقطه ای اغلب برای نشان دادن ارتباط بین دو متغیر مانند شدت سیگنال فلورسانس و اندازه سلول استفاده می شوند.
- نمودار چگالی: یک نمودار چگالی یک نمودار دو بعدی است که توزیع یک متغیر را در یک جمعیت نشان می دهد. در فلوسایتومتری، نمودارهای چگالی اغلب برای نشان دادن توزیع دو متغیر مانند شدت سیگنال فلورسانس و اندازه سلول استفاده می شوند.
- نمودار نقشه ای: یک نمودار نقشه ای یک نمودار سه بعدی است که سه متغیر را در یک جمعیت نشان می دهد. در فلوسایتومتری، نمودارهای نقشه ای اغلب برای نشان دادن ارتباط بین سه متغیر مانند شدت سیگنال فلورسانس، اندازه سلول و شکل سلول استفاده می شوند.
انتخاب نوع نمودار مناسب برای نمایش داده های فلوسایتومتری به عوامل مختلفی بستگی دارد، از جمله تعداد متغیرهایی که باید نشان داده شوند، ماهیت داده ها و هدف از تجزیه و تحلیل.
فناوری فلوسایتومتری
روش رایجی که بیشتر توسط محققین جهت تشخیص سلولهای طبیعی و نئوپلاستیک بر روی لام فیکس شده صورت میگیرد بر اساس ارزیابیهای سیتولوژیکی و شکل ظاهری مرفولوژی آنها مبتنی است. متخصصین آسیب شناسی علی رغم تهیه رنگهای متنوع جهت رنگ آمیزی سلولهای مختلف یک بافت، به سهولت و به سرعت قادر به شمارش انواع سلولهای موجود در مقطع بافت مورد مطالعه نیستند و همچنین نمیتوانند سلولهایی را که دارای منشأ اجدادی گوناگون و یا در مراحل مختلف تمایز هستند، تشخیص دهند. در طی سالهای دهه ۶۰ میلادی تلاش جمعی از دانشمندان در زمینههای مختلف منجر به ابداع تکنیک فلوسایتومتری ،گردید که این تکنیک در زمینه برطرف نمودن مشکلات فوق از تواناییهای خاصی برخوردار است.
سیتومتری (Cytometry) یا یاخته سنجی به معنی تفکیک اجزاء سلولی متعدد در یک نمونه است. دستگاه فلوسایتومتری اجزاء متعدد سلولی را تعیین کرده و همزمان مورد شمارش قرار میدهد. خصلتهایی که توسط فلوسایتومتری قابل اندازه گیری هستند شامل اندازه سلول پیچیدگی سیتوپلاسمی، محتوی DNA یا RNA سلول و طیف گسترده ای از پروتئینهای داخل سلولی و یا متصل به غشاء میباشد.
در روش فلوسایتومتری سلولهای رنگ آمیزی شده چه) به وسیله منوکلونال آنتی بادی متصل به فلورسنت و چه فلورو کرومهای متصل شونده به اجزاء (سلولی در یک جریان سیال قرار گرفته و به صورت تک تک از مقابل پرتوی نوری (لیزر) عبور میکنند و متعاقب آن نور پراکنده شده و نور فلورسانس جانبی توسط آشکارسازها جمع آوری می.شوند این آشکارسازها سیگنالهای نوری را به سیگنالهای الکتریکی متناسب با نور جمع آوری شده تبدیل میکنند پراکنش نور در زاویههای مختلف میتواند سلولها را بر اساس تفاوت در اندازه و پیچیدگی درونی از هم متمایز کند در حالی که ساطع شدن نور فلورسانس از آنتی بادی نشاندار شده با فلورسنت میتواند سلولها را بر اساس تفاوت در آنتی ژنهای سطحی و سیتوپلاسمی از هم تفکیک نماید. بدین ترتیب سلولها بر اساس خصوصیاتی نظیر ،حجم، گرانولاسیون و میزان رنگ پذیری از هم افتراق داده می شوند.
در طول سالیان گذشته ایمونوفنوتایپینگ توسط فلوسایتومتری کمک بسیاری در تشخیص، طبقه بندی و پیگیری بعد از درمان سرطانهای خون کرده است. امروزه اساس طبقه بندی بدخیمی های خون بر پایه خصوصیات طبیعی سلولهای رده های مختلف در مراحل بلوغ میباشد ایمونوفتوتایپینگ توسط فلوسایتومتری روشی سریع و آسان است. این روش با خصوصیت منحصر به فردی که دارد سلولهای مختلف را بر اساس آنالیز چند پارامتری تشخیص میدهد.
فلوسایتومتری نقش مهمی در زمینه های مختلف آسیب شناسی هماتولوژی ایمنی شناسی، بیماریهای عفونی، بررسی پیوند اعضاء نئوپلازیا و ژنتیک دارد و از طرفی بررسی وقایع چرخه سلولی و نقایص موجود در DNA جهت تشخیص انواع لوکمی ها و لنفومها بوسیله فلوسیتومتری امکان پذیر است. همچنین این روش در تشخیص بیماریها تعیین پیش آگهی و هم برای ارزیابی درمان بدخیمی ها کاربرد دارد. فلوسایتومترهای کلینیکی معمولاً برای استفاده آزمایشگاههای کلینیکی تنظیم شده است، اما بعضی از آنها ظرفیت جداسازی (Sorting) انتخابی سلولها را دارا میباشند که در کارهای تحقیقاتی مورد استفاده هستند. پیشرفتهای همزمان در وسایل و تجهیزات تولید آنتی بادیهای ،منو،کلونال رنگهای فلورسانس کامپیوتر و نرم افزار دریچه جدیدی جهت استفاده از تکنیک ،فلوسایتومتری در آزمایشگاه های کلینیکی گشوده است.
در فلوسایتومتری مدرن مجموعه ای از فن آوریهای گوناگون برای سنجش سلولها و بررسی ساختمان و محتوای درونی آنها بکار گرفته شده است. در این روش حتی ذرات کوچکتر از ۰/۱ میکرومتری قابل تشخیص بوده و آستانه رنگ سنجی آن حدود ۱۰۰۰ مولکول رنگ یا ۱۸-۱۱۰ گرم رنگ به ازای هر سلول است. بدین مفهوم که اگر یک گرم رنگ در حجمی به ابعاد ۳۰۰۰Km × ۳۰۰۰ Km × ۳۰۰m حل شود دستگاه قادر به تشخیص آن میباشد.
کاربردهای فلوسایتومتری
به طور کلی کاربرد پزشکی فلوسایتومتری را میتوان در چهار مورد خلاصه کرد:
- تشخیص و طبقه بندی سرطانهای خون توانایی تشخیص دقیق جمعیتهای سلولی غیر طبیعی همراه با تعیین رده و میزان بلوغ سلولها
- سنجش فاکتورهای بیولوژیکی و حضور بعضی مولکولهای اختصاصی که در تعیین پیش آگهی بیماری نقش دارند.
- شناسایی آنتی ژنهایی که به عنوان هدفهای درمانی استفاده میشود استفاده از آنتی بادی بر علیه آنتی ژن های خاص که سلول بدخیم آن را بیان میکند
- شناسایی سلولهای باقی مانده بدخیم در طول درمان که در تعیین پاسخ به درمان و احتمال عود بیماری بسیار مهم هستند.
مزایای سیستم فلوسایتومتری بر سایر روشهای اندازه گیری فلوروسانس
1. عینی بودن Objective
2. حساسیت بالا دستگاه میتواند تا بیش از هزار مولکول فلوئوروکروم را در سلول مشخص کند)
3. سرعت عمل زیاد که بررسی تعداد زیادی سلول را ممکن می سازد (۱۰۵×۱ سلول در هر دقیقه)
4. توانایی تشخیص سلولهای نادر با مشخصات اختصاصی در یک جمعیت هتروژن و ناهمگن
5. توانایی مطالعۀ سلولهای زنده فیکس نشده
6. توانایی اندازه گیری معیارهای همزمان چندین پارامتر و تطابق چند حساسیت هر سلول معلق در مایع
اصول فلوسایتومتری
تکنولوژی فلوسایتومتری بر اساس خصوصیات فیزیکی و شیمیایی سلولها یا دیگر ذرات میباشد، هنگامی که این سلول ها یا ذرات از مقابل یک سیستم آشکارسازی نوری Photo Detector عبور می کنند، ارزیابی می گردند. از آن جایی که هر سلول وقتی از جلو سیستم گذر مینماید به تنهایی اندازه گیری و آنالیز میشود و همچنین به سبب این که اندازه گیریهای متعدد و مختلف در زمان واحد انجام میشود، بنابراین پارامترهای مختلف چند هزار سلول در طول مدت زمانی بسیار کوتاهی محاسبه میگردد. بطور کلی اینکه، دستگاه فلوسایتومتری به نحوی طراحی شده است که قادر است تعداد زیادی سلول و ذرات بیولوژیکی مانند هسته های جدا شده سلولی، کروموزوم ها و میکروارگانیسم ها را در محیط مایع با استفاده از اشعه لیزر، آنالیز نموده و خواص فیزیکی آنها مانند اندازه نسبی و میزان گرانولیتی سیتوپلاسم را مشخص نماید. باید دانست که فلوسایتومتری قادر است تعداد ۱ سلول سرطانی در میان ۱۰۰۰۰ تا ۱۰۰۰۰۰ سلول عادی موجود در نمونه مغز استخوان را شناسایی کند.
در اثر تابش اشعه لیزر به سلولها و برحسب اندازه و ساختمان داخلی ،آنها سیگنالهای نوری حاصل میشود که بوسیله تقویت کننده های نوری PMT = Photo Multiplier Tube دستگاه به سیگنال الکتریکی تبدیل میگردد و پس از آنالیز بوسیله کامپیوتر به شکل نمودار نمایش داده میشود. چنانچه سلول ها به وسیله رنگ های اختصاصی DNA و RNA پروتئین شاخصهای سطح سلولها و اجزای درون سلولی رنگ آمیزی شده باشند در اثر تابش اشعه لیزر فلوروکروم متصل به آنها تحریک شده و در برگشت به حالت پایدار اولیه سیگنالهای فلوئورسنت خاص با طول موج جذبی مخصوص خود ایجاد مینماید این سیگنال فوتون نوری دارای طول موج بالایی بوده و انرژی تابشی دارد که مختص رنگ آن است سیگنالهای فوق نیز به سیگنالهای الکتریکی تبدیل گردیده و در نتیجه کلیهٔ مشخصات سلولی اعم از گرانولیتی ساختمان درون سیتوپلاسم و شاخصهای مورد نظر سطحی سلول به طور همزمان بصورت نمودار گزارش میشوند.
آماده سازی نمونه
برای انجام هر نوع فلوسایتومتری ابتدا باید سلولها را آماده کرد به طوری که سلولها به صورت تکی درآمده و در محیط مناسبی معلق شده باشند. بعضاً یک مرحله تخلیص برای بالا بردن غلظت سلولهای مورد نظر در نمونه ضرورت پیدا می.کند روشهای مختلفی برای تهیه تخلیص و آماده سازی سلول وجود دارند و روش انتخاب شده به نوع سلول مورد ارزیابی بستگی دارد پس از تهیه سوسپانسیون مناسب، سلولها باید با مواد فلورسانس رنگ شوند و یا با آنتی بادیهای کونژوگه با فلوروکروم نشاندار شوند. روش نشاندار کردن تحت تأثیر فاکتورهای زیادی مانند میزان اختصاصی بودن آنتی بادی و غلظت آنتی ژن در سطح یا داخل سلول، مناسب بودن غلظت آنتی بادی مورد استفاده و بکار بردن کنترلهای مثبت و منفی مناسب در آنالیز سلولها قرار می گیرد.
تمرکز هیدرودینامیک Hydrodinamic Focousing
خصوصیت اصلی یک سیستم فلوسایتومتری این است که اندازه گیریها بر روی نمونه های سلولی که در دستگاه جریان می یابند انجام میشود. اگر از یک لوله جهت انتقال نمونه استفاده شود سلول ها نمی توانند به طور مکرر به نقطه اندازه گیری محل برخورد لیزر به (سلول بروند. اگر از لوله های باریک جهت اطمینان از انتقال تکرار پذیر سلولها استفاده شود احتمال دارد با عبور سلولهای بزرگتر مسیر بسته شود. برای حل این مشکل از روش تمرکز هیدرودینامیک Hydrodinamic Focousing کمک گرفته میشود. در این روش جریان آرامی از سلولها را به درون جریان حامل سریع Sheath fluid) وارد میکنند. مایع حامل، سلولها را در مرکز لوله متمرکز میکند بنابراین سلولها به طور منظم و در یک مسیر مجازی به نقطه اندازه گیری منتقل میشوند.
هدف از آماده سازی نمونه تهیه یک سوسپانسیون از پارتیکلهای منفرد است که به روش خاصی رنگ آمیزی شده اند تا در سیستم بدون ایجاد اختلال در جریان یکنواخت مایع (سیال) و یا انسداد لوله و منافذ دستگاه عبور کنند. در سیستم فلوسایتومتری سلولهای معلق در مایع ایزوتونیک از طریق سیستم حسی با فشار هوا از ظرف حاوی نمونه به لولۀ مخـ صوصی منتقل شده و به یک محفظه خاصی به نام «حفره جریان» » Flow chamber وارد میشوند مایع پوششی Sheath fluid در حفره ،نمونه یک اثر تمرکز هیدرودینامیکی ایجاد کرده و نمونه را به داخل جریان میکشاند که زیادتر بودن سرعت جریان مایع پوششی نسبت به مایع حاوی ،نمونه سبب هدایت سلولها به صورت منفرد تک تک جهت عبور از سوراخ انتهایی میشود تا در نقطه خاصی در مقابل اشعه لیزر قرار بگیرد. سلول از لوله شیشه ای با سرعتی حدود ۵ تا ۵۰ متر در ثانیه از میان منفذی باریک و از مقابل پرتوی یک یا چند منبع نوری که غالباً لیزر است، عبور می کنند بدین ترتیب امکان جمع آوری اطلاعات مربوط به ۵۰۰۰ تا ۵۰۰ سلول در هر ثانیه فراهم می شود.
فلورسانس
فلوسایتومتری بر خصوصیات پراکنده سازی نور توسط سلولها و نیز بر نشر فلورسانس از آنها استوار است. نشر فلورسانس با استفاده مستقیم از مواد رنگ کننده فلورسنت حاصل میشود در این روش که مستقل از آنتی بادی است غالباً از فلو کرومهای متصل شونده به RNA ، DNA و یا دیگر اجزای سلولی استفاده می شود یا ترکیبی از رنگ فلورسنت با آنتی بادیهای مونوکلونال که تحت نام عمومی کونژوگه مورد استفاده قرار میگیرد. در این حالت انتخاب محل اتصال به سلول توسط جزء آنتی بادی موجود در کونژوگه صورت می گیرد و این آنتی بادی است که به صورت کاملاً ،اختصاصی آنتی ژن هدف را بر روی سلول یا در داخل آن شناسایی کرده و به آن متصل میشود و جزء فلورسنت موجود در کونژوگه ابزاری برای ردیابی محل و میزان آنتی بادی های متصل شده به هدف میباشد.
سیستم نوری فلوسایتومتری
سیستم نوری فلوسایتومتر متشکل از یک یا چند منبع نوری به همراه یک سری از عدسیها فیلترها آشکارسازها است. عدسیها و فیلترها جهت انتقال نور منبع به نقطه اندازه گیری و نیز برای انتقال نور پراکنده فلورسانس از نقطه اندازه گیری به آشکارسازها به کار می روند.
الف) منبع نور
انواع مختلفی از منابع نوری برای فلوسایتومتر وجود دارند. در فلوسایتومترهای مدرن نور لیزر به عنوان منبع نوری بکار میرود لیزر نسبت به جیوه یا لامپهای دیگر مزایایی دارد که از آن جمله میتوان به تولید نور منوکروم تک رنگ و با اندازۀ نقطهای بسیار کوچک آن اشاره کرد این اندازهٔ نقطه ای بسیار مهم است زیرا هرچه نور در فضای کوچکتری محدود شود میزان تهییج سلول به حد ماکزیمم نزدیکتر میشود علاوه بر این باعث اطمینان از قرار گرفتن تنها یک سلول در برابر نور در هر لحظه میگردد. بیشترین لیزر مصرفی نیزه لیزر آرگون با طول موج ۴۸۸ نانومتر میباشد که با هوا سرد میشود ارزان تر هم بوده و قابل دسترس تر است. لیزرهای دیودی نیز به دلیل پایداری و قیمت ارزان مورد استفاده قرار میگیرند و معمولاً طول موج (ششصد و سی و پنج نانومتر آن مورد استفاده است.
ب) فیلترها
سیستم نوری فلوسایتومتر سیگنالهای فلوئورسانس ساطع شده از سلولها را به یک سیستم الکترونیکی هدایت می کند این سیستم از یک سری فیلترهای مخصوص جذب نور و آینه های Dichoric یا دو رنگ نما تشکیل شده است. فیلترهای نوری فقط طول موج خاصی را عبور داده و مانع عبور سایر طول موج ها میشوند. فیلترهای دو رنگ ،نما آینه های انتخابی هستند که اجازه عبور طول موج های بلند را میدهند و طول موج های کوتاه را منعکس میکنند فیلتر باند عبوری جهت عبور باند باریکی از طول موج بین ۶۴۰ – ۶۲۰ نانومتر طراحی شده است. فیلترهای جذب نور در زاویه 90 نسبت به مسیر تابش اشعه لیزر قرار گرفته اند و اینههای Dichoric نسبت به فیلترها در زاویه 450 قرار دارند علاوه بر این دتکتورهای خاصی به منظور دریافت سیگنالهای حاصل از اندازه سلول و گرانولیتی در این سیس تم وجود دارند که اصطلاحاً Fs sensor SS sensor نامیده می.شوند به مجرد عبور یک سلول از مقابل اشعه ،لیزر چندین پارامتر فیزیکی و فلوئورسانس آن بطور همزمان اندازه گیری میشود.
ج) آشکارسازها:
با عبور ذرات یا سلولها از مقابل پرتو ،لیزری مولکولهای فلورسانس سطح سلول فوتونهایی با طول موج خاص در همه جهات تابش میکنند سیستم اپتیکی بخشی از این فوتونها را به آشکارسازها (Detector) می رسانند. فوتودیودها (PD) و فوتومولتی تیوبها (PMT) به خاطر حساسیت بالای آنها به عنوان آشکارساز
استفاده میشوند ابتدا فوتونهای رسیده از نمونه توسط آشکارسازها به فوتوالکترون تبدیل شده و سپس جریان الکتریکی آن به ولتاژ تبدیل می.شود به دلیل اینکه سیستم الکترونیکی ولتاژ را اندازه گیری و مقایسه می کند. باید خروجی آشکارساز به ولتاژ تبدیل گردد تبدیل جریان به ولتاژ با عبور جریان با شار الکتریکی از یک مقاومت انجام میگیرد آن چه اتفاق می افتد بر اساس قانون اهم قابل پیش بینی است. ولتاژ تولید شده برابر حاصل ضرب جریان در مقاومت است و چون مقدار مقاومت ثابت است ولتاژ خروجی مستقیماً متناسب با جریان ورودی است مدار الکترونیکی که این تبدیل را انجام میدهد تقویت کننده Trans impedence” نام دارد که میتواند در مدار بخش PMT جاسازی شود. این مدار جریان فوتو الکترونها را به ولتاژ تبدیل کرده و تقویت خطی ولتاژ را فراهم می کند.
پراکنش در فلوسایتومتری
اگر چه سلولها به خودی خود دارای فلورسانس اندکی در برخی طول موجها هستند اما بدون بکارگیری نور تهییج کننده (لیزر) هیچ سیگنالی تولید و به ردیابهای دستگاه ارسال نخواهد شد پس از برخورد نور لیزر به سلولها بازتاب نور لیزر در جهات مختلف پراکنده شده و توسط ردیابهایی که در زوایای مختلف قرار دارند، برای کسب اطلاعات جمع آوری میشود.
در صورتی که سلول به صورت یک کره همگن و یکنواخت، باشد در اثر تابش لیزر نور تحت زاویه 360 توسط سلول پراکنده و بوسیلهٔ آشکارساز مستقیم s sensor که در زاویه نسبت به محور تابش لیزر قرار دارد، دریافت و اندازه گیری میشود این نور اصطلاحاً FALS نامیده میشود و مقدار آن رابطه مستقیم با اندازه سلول دارد. به عبارت دیگر نوری که در جهت مستقیم پراکنده میشود (Forward ) متناسب با سایز سلول یا ذره است.
مقدار نوری که تحت زاویه 90 نسبت به محور تابش لیزر از سلول پراکنده میشود. اصطلاحات نور SS نامیده می شود و مقدار آن بستگی به خصوصیات شکست نور توسط سلول اجزای درونی، میزان گرانولیتی سیتوپلاسم، ساختمان هسته و سطح سلول ناهمواری غشاء دارد برای مثال یک گلبول قرمز رسیده با سیتوپلاسم همگن بدون هسته و اندامکهای سیتوپلاسمی، نسبت به یک یاخته ائوزینوفیل که حاوی گرانولهای سیتوپلاسمی زیاد و هسته مرکب از چند قطعه است تفرق نوری 90 بسیار کمتری دارد. سیگنال پراکنش نوری °90 توسط آشکارساز قائمه دریافت میشود و به سیگنال دیجیتالی تبدیل می گردد.
از نظر میزان نور SS لنفوسیتها و گرانولوسیتها به ترتیب از کم به زیاد قرار دارند به این ترتیب موازین FALS و SS میتواند برای مشخص کردن تیپ هر کدام از سلولها بکار رود و رابطه آن بدین شرح است:
گلبولهای قرمز و نخاله های سلولی لنفوسیت منوسیت گلبولهای سفید چند هسته ای
انتشار فلوئورسانس
علاوه بر این اگر مولکولهای فلورسنت و یا فلور و کروم ها به سلولها متصل شده باشند توسط نور تابیده تهییج شده و بازتابی حاصل میشود که سایر ردیابها و فیلترهای نوری آن را جذب می.کنند مولکولهای فلورسنت میتوانند متصل شده به آنتی بادیها رنگهای حساس به Ca و متصل شده به اجزای سلولی مولکولهای فلورسنتی که توسط سلول بروز داده میشوند و رنگهای متصل شونده به DNA باشند. نتیجه دقیق، بررسی چند پارامتری هر ذره یا سلول است و تعداد پارامترهای بررسی شده بستگی به تعداد مولکولهای فلورسنتی دارد مورد استفاده قرار گرفته است.
آشکارساز فلورسانس، امواج فلورسانس منتشره از برخورد نور لیزر به فلوروکرومهای متصل به سلول را دریافت می کند این آشکار ساز در زاویه 90 نسبت به منبع نوری یعنی روبروی آشکارساز قائمه قرار می گیرد. در صورت مطالعه همزمان چند فلوروکروم که به اجزاء مختلف سلولی متصل شده اند، می توانیم از چندین آشکارساز فلورسانس استفاده کنیم.
بر اساس پارامترهای تفرق نوری (FALS و SS می توان gateهای الکترونیکی (محدوده ها) بدور دسته جات سلولی مورد نظر برای تجزیه با فلورسنت ،کشید آنگاه فلوئورسانس سلول ها در نمونه می تواند بطور انتخابی تعیین شود و بصورت توزیع کثرت ترسیم گردد. کلیه اطلاعات توسط یک کامپیوتر که در یک سیستم گنجانیده شده است جمع آوری محاسبه و ذخیره می گردد.
غالباً حجم مورد نیاز از نمونه مورد آزمایش نیز خیلی کم و حدود ۱۰۰ میکرولیتر می باشد. بررسی فلوسایتومتریک هر چه زودتر باید انجام شود پس از نمونه گیری بهر حال نمونه ها را میشود برای ۲۴ ساعت در دمای اتاق مخصوص خون (کامل) و یا °4 (مخصوص سلولهای منونوکلئر جدا شده) نگهداری نمود و سپس ایمونوفنوتایپینگ انجام داد در هنگامی که نمونه ها برای بیشتر از ۲۴ ساعت نگهداری میشوند، اضافه کردن محیط کشت سلولی مانند RPMI ضروری است.
فلوروکروم ها در فلوسایتومتری
برای انجام فلوسایتومتری لازم است که ابتدا سلولها با فلوروکرومها نشاندار شوند. از طرفی برای نشاندار کردن اجزاء داخلی سلول باید اقدامات خاصی را انجام داد تا آنها در دسترس آنتی بادی یا ماده فلورسنت قرار گیرند. تعداد فلوروکرومهای مورد استفاده برای فلوسایتومتری در طی سالیان متمادی مرتباً افزایش یافته است و این احتمال وجود دارد که در آینده تعداد فلوروکرومهای مورد استفاده برای آنالیز سلولها بیش از این نیز افزایش یابد. شناخت انواع فلوروکروم ها و آگاهی از مزیتها و معایب هر کدام تنها راه استفاده بهینه از آنها برای دستیابی به مقاصد علمی تحقیقاتی است. امروزه پر مصرف ترین رنگهای فلوئورسان متصل به آنتی بادیها در فلوسایتومتری ،بالینی فلوئورسین ایزوتیوسیانات (FITC) و فیکواریترین (PE) میباشند. تمامی این
رنگهای فلوئورسان در محدوده 488nm طیفهای جذبی دارند ،بنابراین یک تک طول موج تحریکی لیزری میتواند تمامی این دو رنگ را تحریک کند.
فلوسایتومترهای اولیه قادر بودند فقط یک یا دو رنگ فلورسانس را تجزیه و تحلیل کنند اما امروزه دستگاههایی عرضه شده اند که قادرند چندین رنگ فلورسانس را به طور هم زمان ردیابی و تجزیه و تحلیل کنند. پیشرفت های همزمان در وسایل تولید آنتی بادیهای منوکلونال رنگهای فلوئورسانس کامپیوتر و نرم افزار دریچه جدیدی جهت استفاده از تکنیک فلوسایتومتری در آزمایشگاههای کلینیکی گشوده است.
سیستم کامپیوتری
این سیستم پالسهای دیجیتال آشکارسازها را دریافت کرده و به آنالیز داده ها می پردازد. امروزه نرم افزارهای جدیدی برای آنالیز سریع تر دادهها در دسترس میباشند همچنین کنترل قسمتهای مختلف دستگاه فلوسایتومتری بر عهده این سیستم میباشد.
اهمیت فلوسایتومتری در بررسی فنوتیپ سلولها
آنتی ژنهای سلولی که اصطلاحاً به نام CD) clusters of Differentiation) نامیده می شود. شاخصهای شناسایی انواع مختلف سلولی نیستند بلکه فعالیتهای مهم سلولی را تنظیم می کنند و اکثراً از جنس پروتئین یا گلیکوپروتئین هستند این مولکولها به عنوان گیرنده های فاکتورهای اصلی رشده سیتوکین ها و پروتئینهای سرمی عمل میکنند و یا به عنوان آنزیمهای غشائی فعالیت نموده و اتصال سلول ها را به سایر سلولها و اجزاء ماتریکس خارج سلولی میسر مینمایند این شاخصهای شناسائی به وسیله متدهای فلوسایتومتری به راحتی قابل تشخیص و ارزیابی میباشند. بررسی شاخصها جهت افتراق جمعیت های سلولی خاص نیز بکار میرود و میتوان بدین طریق با توجه به این شاخص های آنتی ژنی سلولها را از یکدیگر تفکیک کرد همچنین امروزه با تکنیک فلوسایتومتری Fluorescence FACS Activated Cell Sorter علاوه بر خصوصیات سلولها میتوان سلولها را از یکدیگر تفکیک نموده و در لوله های جمع کننده مخصوص هر نوع سلول جمع آوری نمود و بر روی آنها تحقیقات انجام داد.
سلولها از اجزاء مختلفی مثل غشاء سیتوپلاسمی غشاء هسته ای هسته و سیتوپلاسم تشکیل میشوند و تقریباً همه مولکولهای موجود در قسمتهای مختلف سلول را میتوان با استفاده از فلوسایتومتری ردیابی و تعیین مقدار نمود. معمولاً مولکولهای سطحی موجود در غشاه سیتوپلاسمی به راحتی در دسترس آنتی بادی قرار میگیرند ولی برای رسیدن آنتی بادی یا ماده فلورسانس به مولکولهای درونی سلول روشهای مطمئن و مؤثری لازم است هر سلولی بر حسب نوع و تخصصی که به عهده دارد مولکولهای مختص به خود را بیان میکند؛ بدین معنی که همهٔ ژنها در همه سلولها بیان نمیشوند بلکه برحسب وظیفه ای که در طی تمایز بر عهده سلول گذاشته شده است و بر حسب محیطی که در آن قرار میگیرد هر سلولی خود انتخاب میکند که در پاسخ به شرایط محیطی کدام ژن را فعال سازد بنابر این ردیابی پروتئینهای سلولی حاصل از بیان ژنها هم در سطح و هم در درون سلول میتواند وسیلهای بسیار مفید برای شناسایی سلول باشد. مولکولهای سطحی سلولها تحت نام عمومی Cluster Differentiation CD می باشد شناخته میشوند و برای ردیابی آنها از آنتی بادیهای متوکلونال کونژوگه با فلوروکروم استفاده می شود. مثلاً مارکرهای سطحی سلولهای NK عبارتند از CD16 و CD56 که آنتی بادیهایی با همین نام قادرند این مولکولها را در سطح سلول شناسایی نمایند اغلب لفظ آنتی بادی در گفتار یا نوشتار حذف می شود مثلاً کونژوگه CD16 همان آنتی بادی شناسایی کننده CD16 می باشد که متصل به ژوگه CD34 اشاره به آنتی بادی شناسایی کننده CD34 دارد که با فلوروکروم مناسبی کونژوگه شده است مارکر اختصاصی سلولهای ریشهای تمایز نیافته مغز استخوان می باشد.
اهمیت فلوسایتومتری در بررسی فنوتیپ سلولها
آنتی ژنهای سلولی که اصطلاحاً به نام CD) clusters of Differentiation) نامیده می شود. شاخصهای شناسایی انواع مختلف سلولی نیستند بلکه فعالیتهای مهم سلولی را تنظیم می کنند و اکثراً از جنس پروتئین یا گلیکوپروتئین هستند این مولکولها به عنوان گیرنده های فاکتورهای اصلی رشده سیتوکین ها و پروتئینهای سرمی عمل میکنند و یا به عنوان آنزیمهای غشائی فعالیت نموده و اتصال سلول ها را به سایر سلولها و اجزاء ماتریکس خارج سلولی میسر مینمایند این شاخصهای شناسائی به وسیله متدهای فلوسایتومتری به راحتی قابل تشخیص و ارزیابی میباشند. بررسی شاخصها جهت افتراق جمعیت های سلولی خاص نیز بکار میرود و میتوان بدین طریق با توجه به این شاخص های آنتی ژنی سلولها را از یکدیگر تفکیک کرد همچنین امروزه با تکنیک فلوسایتومتری Fluorescence FACS Activated Cell Sorter علاوه بر خصوصیات سلولها میتوان سلولها را از یکدیگر تفکیک نموده و در لوله های جمع کننده مخصوص هر نوع سلول جمع آوری نمود و بر روی آنها تحقیقات انجام داد.
سلولها از اجزاء مختلفی مثل غشاء سیتوپلاسمی غشاء هسته ای هسته و سیتوپلاسم تشکیل میشوند و تقریباً همه مولکولهای موجود در قسمتهای مختلف سلول را میتوان با استفاده از فلوسایتومتری ردیابی و تعیین مقدار نمود. معمولاً مولکولهای سطحی موجود در غشاه سیتوپلاسمی به راحتی در دسترس آنتی بادی قرار میگیرند ولی برای رسیدن آنتی بادی یا ماده فلورسانس به مولکولهای درونی سلول روشهای مطمئن و مؤثری لازم است هر سلولی بر حسب نوع و تخصصی که به عهده دارد مولکولهای مختص به خود را بیان میکند؛ بدین معنی که همهٔ ژنها در همه سلولها بیان نمیشوند بلکه برحسب وظیفه ای که در طی تمایز بر عهده سلول گذاشته شده است و بر حسب محیطی که در آن قرار میگیرد هر سلولی خود انتخاب میکند که در پاسخ به شرایط محیطی کدام ژن را فعال سازد بنابر این ردیابی پروتئینهای سلولی حاصل از بیان ژنها هم در سطح و هم در درون سلول میتواند وسیلهای بسیار مفید برای شناسایی سلول باشد. مولکولهای سطحی سلولها تحت نام عمومی Cluster Differentiation CD می باشد شناخته میشوند و برای ردیابی آنها از آنتی بادیهای متوکلونال کونژوگه با فلوروکروم استفاده می شود. مثلاً مارکرهای سطحی سلولهای NK عبارتند از CD16 و CD56 که آنتی بادیهایی با همین نام قادرند این مولکولها را در سطح سلول شناسایی نمایند اغلب لفظ آنتی بادی در گفتار یا نوشتار حذف می شود مثلاً کونژوگه CD16 همان آنتی بادی شناسایی کننده CD16 می باشد که متصل به ژوگه CD34 اشاره به آنتی بادی شناسایی کننده CD34 دارد که با فلوروکروم مناسبی کونژوگه شده است مارکر اختصاصی سلولهای ریشهای تمایز نیافته مغز استخوان می باشد.
جداسازی سلولی در فلوسایتومتری
بیشترین مورد استفاده از فلوسایتومتری ارزیابی آنتی ژنهای سطحی بیان شده بر روی سلولها می باشد اما علاوه بر آن سلول ها ممکن است با روشهای مختلف برای اندازه گیری خصوصیات عملکردی بوسیله فلوسایتومتری مورد بررسی قرار گیرند میتوان تغییرات زمانی بیان گیرنده ها را تعیین کرد یا بر همکنش یک نوع سلول را با سلول دیگر اندازه گیری نمود. بعلاوه، امکان ارزیابی تغییرات در فعالیت آنزیمها و پتانسیل غشایی وجود دارد. همچنین میتوان آزمایشاتی برای نشان دادن فاگوسیتوز و آزادسازی مولکولهای فعال زیستی انجام داد.
روش جداسازی سلولها با استفاده از خصوصیات فلورسانس آنها توسط ایمونولوژیستهایی ابداع شد که تلاش می کردند جمعیتهای خالص سلولها را از نمونه های مختلط تهیه کرده و پس از تکثیر آنها در محیط کشت سلولی، نقش مجزای هر سلول را در سیستم ایمنی بررسی نمایند جداسازهای جریانی وسایلی ضروری و پر طرفدار در علوم بیولوژیکی و علوم دیگر هستند کارآیی اصلی این جداسازها چنانچه از نامشان برمی آید. جدا کردن جمعیت های سلولی دلخواه از میان جمعیتی هتروژن از سلولها برای مطالعه بیشتر میباشد. بطور کلی اگر سلول یا ذره ای دارای خصوصیات منحصر به فردی از نظر فیزیکی یا شیمیایی باشد با استفاده از آن خصوصیات می توان براحتی آن را شناسایی کرده و از دیگر سلولهای همراه جدا کرد.
با استفاده همزمان از دو روش آنالیز سلولی و جداساز سلولی Cell Sorter امکان مطالعه بیشتر و کشت سلولهای کاملاً شناخته شده از نظر فنوتایپی یا رفتاری فراهم می.گردد در حضور یونهای کلسیم خصوصیات طیفی برخی از رنگهای فلورسنت تغییر مییابد از این رنگها برای اندازه گیری تغییرات غلظت کلسیم اجزاء سلولی در هنگامی که سلولها بوسیله انواع محرکها تحریک میشوند استفاده میشود
کنترل کیفی در فلوسایتومتری
داشتن برنامه های کنترل کیفی برای روشها و تجهیزات در هر نوع فلوسایتومتری ضروری بوده و یک نیاز اساسی محسوب میگردد این برنامه ها برای اطمینان از کیفیت نتایج بدست آمده به کار برده میشوند. همچنین برنامه های کنترل کیفی بایستی مرتباً و در حد کفایت انجام شوند تا تشخیص نقاط اشکال به آسانی ممکن گردد. بدین منظور برنامه کنترل کیفی در هر دو زمینه کنترل کیفی داخلی و روشهای ارزیابی کیفی خارجی باید به اجرا گذاشته شوند.
در فلوسایتومتری طی دو مرحله جمع آوری اطلاعات و مرحله آنالیز اطلاعات امکان خطا وجود دارد که با بکارگیری روش صحیح تهیه نمونه سلولی و تنظیم دقیق دستگاه میتوان از خطاهای مربوط به مرحله جمع آوری اطلاعات جلوگیری کرد اما توانایی اپراتور در طراحی صحیح ،آزمایش، تنها جنبه ای از کسب اطلاعات است که برای آن روشهای کنترل خطا وجود ندارد. بدین معنی که انتخاب آنتی بادی مناسب و انتخاب فلوروکروم متناسب با غلظت و موقعیت آنتیژن نیازمند تجربیات و اطلاعاتی است که باید توسط محقق کسب شوند.
روش فلوسایتومتری در سایه افزایش روز افزون تعداد آنتی بادیها تترامرها و رنگهای تولید شده برای استفاده در ارزیابی فعالیت سلولها به عنوان یک ابزار مهم در مطالعه سلولهای سیستم ایمنی در آمده است. فلوسایتومتری چند رنگی این امکان را فراهم آورده است که انواع سلولهای موجود در نمونه خون یا سلولهای کشت شده به تفکیک مورد ارزیابی قرار گیرند. سلولهای تحت مطالعه با استفاده از آنتی بادی های اختصاصی معرف زیرگروه های سلولی شناسایی میشوند و خصوصیات رفتاری آنها نیز با استفاده از آنتی بادی های اختصاصی (مثلاً ضد سایتوکین و یا رنگهای ارزیابی کننده حیات سلولی تعیین میشوند.
فلوسایتومتری pdf
نرم افزار Flowjo
نرم افزار FlowJo یک نرم افزار تجاری برای آنالیز داده های فلوسایتومتری است. این نرم افزار توسط شرکت FlowJo, LLC ساخته شده است. FlowJo یک نرم افزار قدرتمند و انعطاف پذیر است که می تواند برای تجزیه و تحلیل داده های فلوسایتومتری در طیف گسترده ای از کاربردها استفاده شود. این نرم افزار دارای طیف گسترده ای از ویژگی ها و ابزارها است که می تواند برای انجام انواع مختلفی از تجزیه و تحلیل ها استفاده شود. برخی از ویژگی های کلیدی نرم افزار FlowJo عبارتند از:
- امکان وارد کردن داده های فلوسایتومتری از طیف گسترده ای از دستگاه ها و فرمت های فایل
- امکان تجسم داده های فلوسایتومتری به صورت نمودار، هیستوگرام و سایر اشکال
- امکان اعمال انواع مختلفی از تجزیه و تحلیل ها بر روی داده های فلوسایتومتری
- امکان گزارش گیری و مستند سازی نتایج تجزیه و تحلیل
FlowJo یک نرم افزار محبوب در میان محققان و متخصصان آزمایشگاهی است. این نرم افزار در طیف گسترده ای از کاربردها در زمینه های مختلف علوم زیستی و پزشکی استفاده می شود. در ادامه به بررسی برخی از کاربردهای نرم افزار FlowJo می پردازیم:
- تشخیص و طبقه بندی سرطان
- سنجش پاسخ ایمنی
- تحقیقات سلولی و مولکولی
- مطالعات زیست شناسی مولکولی
- ارزیابی داروها و درمان ها
FlowJo یک ابزار قدرتمند و ارزشمند برای محققان و متخصصان آزمایشگاهی است که به آنها کمک می کند تا داده های فلوسایتومتری را به طور موثر و کارآمد تجزیه و تحلیل کنند.
batch analysis در نرم افزار flowjo چیست
تجزیه و تحلیل دسته ای در نرم افزار FlowJo یک فرآیند است که به شما امکان می دهد چندین فایل داده فلوسایتومتری را به طور همزمان تجزیه و تحلیل کنید. این می تواند یک راه حل کارآمد برای تجزیه و تحلیل داده های فلوسایتومتری باشد، به خصوص اگر شما با حجم زیادی از داده ها سروکار دارید. برای انجام تجزیه و تحلیل دسته ای در FlowJo، مراحل زیر را دنبال کنید:
- فایل های داده فلوسایتومتری خود را در FlowJo وارد کنید.
- یک پروژه جدید ایجاد کنید یا یک پروژه موجود را باز کنید.
- از منوی «File»، روی «Batch Analysis» کلیک کنید.
- در پنجره «Batch Analysis»، فایل های داده فلوسایتومتری خود را انتخاب کنید.
- تنظیمات تجزیه و تحلیل خود را تنظیم کنید.
- روی «Run» کلیک کنید.
FlowJo داده های فلوسایتومتری شما را تجزیه و تحلیل می کند و نتایج را در یک پروژه جدید ذخیره می کند.
تصویر 1: پنجره Batch Analysis در نرم افزار FlowJo
تجزیه و تحلیل دسته ای در FlowJo شامل چندین ویژگی است که می تواند به شما کمک کند تا فرآیند تجزیه و تحلیل را ساده تر و کارآمدتر کنید. این ویژگی ها عبارتند از:
- امکان اجرای تجزیه و تحلیل های مختلف روی داده های فلوسایتومتری: FlowJo به شما امکان می دهد تا چندین تجزیه و تحلیل مختلف را روی داده های فلوسایتومتری خود اجرا کنید. این می تواند به شما کمک کند تا اطلاعات بیشتری در مورد داده های خود کسب کنید.
- امکان اعمال تنظیمات مختلف به تجزیه و تحلیل ها: FlowJo به شما امکان می دهد تا تنظیمات مختلف را به تجزیه و تحلیل های خود اعمال کنید. این می تواند به شما کمک کند تا نتایج تجزیه و تحلیل خود را سفارشی کنید.
- امکان ذخیره نتایج تجزیه و تحلیل در قالب های مختلف: FlowJo به شما امکان می دهد تا نتایج تجزیه و تحلیل خود را در قالب های مختلف ذخیره کنید. این می تواند به شما کمک کند تا نتایج تجزیه و تحلیل خود را به راحتی با دیگران به اشتراک بگذارید.
تجزیه و تحلیل دسته ای یک ابزار قدرتمند در نرم افزار FlowJo است که می تواند به شما کمک کند تا داده های فلوسایتومتری خود را به طور موثر و کارآمد تجزیه و تحلیل کنید.
gating در نرم افزار flowjo
در نرم افزار FlowJo، gating یک فرآیند است که به شما امکان می دهد تا سلول ها را بر اساس ویژگی های خاصی در داده های فلوسایتومتری خود گروه بندی کنید. این می تواند برای جداسازی انواع مختلف سلول ها، تشخیص سلول های غیرطبیعی یا تجزیه و تحلیل ویژگی های سلول ها در گروه های مختلف مفید باشد. برای انجام gating در FlowJo، مراحل زیر را دنبال کنید:
- داده های فلوسایتومتری خود را در FlowJo وارد کنید.
- یک پروژه جدید ایجاد کنید یا یک پروژه موجود را باز کنید.
- از منوی «Tools»، روی «Gating» کلیک کنید.
- در پنجره «Gating»، ویژگی هایی را که می خواهید برای gating استفاده کنید، انتخاب کنید.
- تنظیمات gating خود را تنظیم کنید.
- روی «Run» کلیک کنید.
FlowJo سلول ها را بر اساس ویژگی های انتخابی شما گروه بندی می کند و نتایج را در یک پنجره جدید نمایش می دهد.
تصویر 2: پنجره Gating در نرم افزار FlowJo
Gating یک ابزار قدرتمند در نرم افزار FlowJo است که می تواند به شما کمک کند تا داده های فلوسایتومتری خود را به طور موثر و کارآمد تجزیه و تحلیل کنید. در اینجا چند نمونه از چگونگی استفاده از gating در نرم افزار FlowJo آورده شده است:
- جداسازی انواع مختلف سلول ها: می توانید از gating برای جداسازی سلول های سالم از سلول های سرطانی، سلول های عصبی از سلول های غیرعصبی یا هر نوع سلول دیگری بر اساس ویژگی های خاصی استفاده کنید.
- تشخیص سلول های غیرطبیعی: می توانید از gating برای تشخیص سلول های غیرطبیعی، مانند سلول های سرطانی یا سلول های آلوده، بر اساس ویژگی های خاصی استفاده کنید.
- تجزیه و تحلیل ویژگی های سلول ها در گروه های مختلف: می توانید از gating برای تجزیه و تحلیل ویژگی های سلول ها در گروه های مختلف، مانند سلول های سالم و سرطانی، سلول های قبل و بعد از درمان یا سلول های از جمعیت های مختلف، استفاده کنید.
Gating یک ابزار انعطاف پذیر است که می تواند برای طیف گسترده ای از کاربردها در آنالیز داده های فلوسایتومتری استفاده شود.
سعید کارگر
بیوتکنولوژیست و مدیر سایت بیوتکر
5 دیدگاه ها
ممنون از مطالب خوبی که به اشتراک می گذارید
در راستای این مطالب آیا امکانش هست دوره اموزش ویدیویی هم بگذارید؟ با تشکر
خیلی مطلب مفید و کاملی بود
ممنون از سایت خوبتون و محتوایی که با ما به اشتراک می گذارید
خیلی مطلب جالب و مفیدی بود؛ ممنون بابت اشتراک گذاری جزوات