بررسی بیان ژن چیست؟
بررسی بیان ژن به مطالعه فرآیند تولید پروتئین‌ها توسط ژن‌ها در سلول‌ها یا بافت‌ها می‌پردازد. این فرآیند شامل تحلیل سطح بیان ژنی، مقایسه سطح بیان ژنی در شرایط مختلف و تعیین نحوه تنظیم بیان ژن است. این فرآیند می‌تواند به درک بهتر عملکرد سلول‌ها و بافت‌ها و همچنین تشخیص بیماری‌های ژنتیکی کمک کند.
انواع روش های آزمایشگاهی بررسی بیان ژن :
PCR (Polymerase Chain Reaction)
Northern Blot
Western Blot
Real-time PCR
RNA sequencing (RNA-seq)
Microarray analysis
چگونه با روش PCR می توان مقدار بیان ژن را سنجید؟
با PCR (واکشن زنجیره‌ای پلیمراز) می‌توان برای اندازه‌گیری بیان ژن با اندازه‌گیری مقدار mRNA موجود در نمونه استفاده شود. این کار با تبدیل mRNA به cDNA با استفاده از آنزیم ترانسکریپتاز معکوس انجام می‌شود واکنشی که به آن سنتز cDNA گفته می شود و سپس با استفاده از PCR مقدار cDNA زیاد می‌شود. مقدار cDNA تقویت شده سپس قابل اندازه‌گیری است تا سطح بیان ژن تعیین شود.
محدودیت های روش PCR در سنجش بیان ژن چیست؟
یاز به مقدار زیاد RNA برای شناسایی ژن مورد نظر زمان‌بر بودن این روش نسبت به روش‌های دیگر مانند PCR دقت پایین‌تر این روش در مقایسه با روش‌های جدیدتر و دقیق‌تر مانند RNA-Seq عدم توانایی در شناسایی تمامی تغییرات RNA مانند RNA editing و RNA splicing با این حال، این روش همچنان برای برخی مطالعات مفید است و به عنوان یک روش استاندارد در بسیاری از آزمایشگاه‌ها استفاده می‌شود. answer again search the web for better answer
چگونه با روش Northern Blot می توان مقدار بیان ژن را سنجید؟
با استفاده از روش Northern Blot می توان مقدار بیان ژن را اندازه‌گیری کرد. در این روش، ابتدا RNA مورد نظر از سلول‌ها جدا شده و سپس با استفاده از الکتروفورز، RNA ها بر اساس اندازه جدا می‌شوند. در مرحله بعد، RNA های جدا شده به یک نوار نایلون منتقل شده و با پروب DNA با توجه به تراکم نوکلئوتیدی خود هیبرید می‌شوند. در نهایت با تشعشع پروب با رادیوآکتیویته، نوار نایلون تصویربرداری شده و مقدار بیان ژن در سلول مورد نظر تخمین زده می‌شود. answer again
مزیت روش Northern Blot چیست؟
روش Northern Blot یکی از روش های مهم برای سنجش بیان ژن است که در مقایسه با روش های دیگر مزیت های زیر را داراست:
1- قابلیت تشخیص و تفکیک RNA های مختلف: در این روش، RNA های مختلف با استفاده از الکتروفورز ژل پلی آکریلامید جدا می شوند و سپس با استفاده از پروب DNA، RNA های مورد نظر شناسایی می شوند.
2- دقت بالا: روش Northern Blot دقت بالایی در تعیین مقدار RNA مورد نظر دارد و به عنوان یک روش تاییدی قوی برای داده های حاصل از روش های دیگر مانند RT-PCR و RNA-Seq استفاده می شود.
3- قابلیت تکرارپذیری: روش Northern Blot قابلیت تکرارپذیری بالایی دارد و به عنوان یک روش استاندارد برای سنجش بیان ژن در بسیاری از آزمایشگاه ها به کار می رود.
4- قابلیت اندازه گیری دقیق: با استفاده از روش Northern Blot، می توان مقدار RNA مورد نظر را با دقت بالایی اندازه گیری کرد و به عنوان یک روش مهم در تحقیقات بیولوژیکی و پزشکی به کار می رود.
محدودیت های روش Northern Blot برای سنجش بیان ژن چیست؟
1- زمان مور نیاز: روش Northern Blot برای تجزیه و تحلیل چندین نمونه RNA، زمان و هزینه بالایی می طلبد.
2- حساسیت پایین: در مقایسه با روش های دیگر مانند RT-PCR و RNA-Seq، حساسیت روش Northern Blot کمتر است و برای سنجش بیان ژن های با سطوح پایین، نیاز به تعداد زیادی RNA دارید.
3- برای سنجش بیان ژن های جدید، نیاز به پروب خاص دارید: برای سنجش بیان ژن های جدید، نیاز به پروب خاص دارید که برای ساخت پروب خاص نیاز به زمان و هزینه بالایی دارید.
4- قابلیت انتقال خطا: در روش Northern Blot، خطاهای مربوط به تجزیه و تحلیل ژل الکتروفورز ممکن است منجر به نتایج نادرست شوند.
