روش TA کلونینگ :

TA  کلونینگ یک روش ساب کلونینگ است که در آن از آنزیم های محدوالاثر استفاده نمی شود و نسبت به روش معمول کلونینگ سریعتر و ساده تر است. این روش مبتنی بر توانایی بازهای A و T در قطعات مختلف DNA برای هیبرید شدن با یکدیگر است. در این روش قطعه ژنی با استفاده از آنزیم Taq DNA پلیمراز و PCR تکثیر و تولید می شود. این پلیمراز فعالیت تصحیح ‘۳ به ‘۵ ای ندارد و به احتمال زیاد یک ‘۳- آدنین آویزان انتهایی را در هر دو انتهای محصول PCR ایجاد می کند.

آنزیم ترمینال ترانسفراز

در این روش بهتر است که پرایمرهای PCR در انتهای ۵ گوانین داشته باشند زیرا در این حالت Taq پلیمراز با احتمال بیشتری A را در انتهای ۳ قرار می دهد. و کتور هدف نیز با استفاده از آنزیم های محدوالاثر که انتهاهای صاف ایجاد می کنند خطی و سپس به کمک آنزیم ترمینال ترانسفراز به آنها ddTTP اضافه می شود. افزودن وکتور و قطعه مورد نظر در حضور لیگاز باعث جفت شدن A و T های انتهای می شود، شایان ذکر است که امروزه TAکلونینگ وکتورهای تجاری که وکتورهای خطی شده با یک T آویزان انتهایی هستند توسط کمپانی های مختلف تهیه و در دسترس هستند.

مزیت روش TA کلونینگ :

از مزیت های این روش این است که نیازی به اضافه کردن آنزیم های برشی (به غیر از مرحله خطی کردن و کتور) و تهیه پرایمرهای طویل دارای مکان های شناسایی آنزیمهای محدودالاثر نیست.

ایراد روش TA کلونینگ :

اما یکی از معایب این روش این است که جهت قطعه ای که کلون می شود مشخص نیست یعنی ژن هدف ۵۰٪ با جهت معکوس کلون خواهد شد۔

نویسنده : سعید کارگر