پروموتور tac
DeBoer و همکارانش تلاش های خود را برای ساخت پروموتور tac با این ایده شروع کردند که شاید بتوان با ترکیب بخش هایی از دو پروموتور قوی و قابل تنظیم، پروموتور قوی تری ساخت که موجب بیان بسیار زیاد ژن خارجی می شود. زمانی که آن ها مطالعات خود را آغاز کردند، علی رغم این که توالی DNA تعدادی از پروموتورهای پروکاریوتی، بخصوص E.coli شناخته شده بود ولی ویژگی های جزیی که یک پروموتور را قادر می سازد تا در هدایت رونویسی نقش مؤثری داشته باشد، هنوز روشن نبود. البته این مسأله معلوم بود که تقریباً تمام جهش هایی که برقدرت یک پروموتور پروکاریوتی تاثیر میگذارد در منطقه ۱۰ – یا ۳۵- یعنی به ترتیب تقریباً ۱۰ یا ۳۵ جفت باز فرادست جایگاه شروع رونویسی mRNA اتفاق می افتد.
جهش های کارآ
علاوه بر این مشخص شد که فقط جهش هایی که یک پروموتور را بیشتر به توالی های رایجتر هر یک از این مناطق (یعنی TATAAT برای منطقه ۱۰ – و TTGACA برای منطقه ۳۵-) شبیه می کنند، قادر به افزایش قدرت پروموتور می باشد. برای شناسایی توالیهای رایجتر، توالیهای DNA تمام پروموتورهای شناخته شده را مقایسه کرده و معین کردند که کدام نوکلئوتیدها بیشتر تکرار می شود. DeBoer و سایر همکارانش میدانستند که مثلا پروموتور lacUV25 که یک شکل قویتر از پروموتور lac است، در منطقه ۱۰-، توالی رایجتر را داشته ولی در منطقه ۳۵- ندارد. در حالی که توالی رایج تر پروموتور trp که به طور طبیعی رونویسی ژن های مربوط به بیوسنتز تریپتوفان را کنترل می کند، در منطقه ۳۵- و نه ۱۰- قرار گرفته است.
با دانستن این مطلب، آنها تصمیم به ساختن نوعی پروموتور همجوش گرفتند که منطقه ۱۰- پروموتور lac ومنطقه ۳۵ – پروموتور trp را با هم داشته باشد. سپس این پروموتور جدید به نام “tac” را از نظر توانایی آن برای هدایت ساخت آنزیم گالاکتوزکیناز در E.Coli آزمایش کرده و در یک سنجش مشابه، با پروموتورهای trp و lac مقایسه نمودند. همان گونه که آن ها در ابتلا استدلال کرده بودند مشخص شد که پروموتور tac 5 بار از پروموتور trp و ۱۰ بار از پروموتور lac قویتر است. به علاوه، پروموتور tac شبیه آنچه در پروموتور lac دیده می شد، با مهارکننده lac مهار و با IPTG آزاد می شد. بنابراین، این پروموتور جدید، نه تنها قوی بلکه قابل تنظیم هم بود.
دانلود مقاله : پروموتور tac : هیبریدی کارآ مشتق شده از پروموتورهای trp و lac
نویسنده : سعید کارگر
